原核表達質(zhì)粒載體構建服務

原核表達質(zhì)粒載體構建服務

世聯(lián)博研生命科學服務中心提供you質(zhì)的原核表達質(zhì)粒載體構建服務。大腸桿菌(E. coli)作為蛋白表達系統(tǒng)，具有兩個顯著特征：操作簡單，可在廉價的培養(yǎng)基中高密度生長。它的這些特征使其在科研應用中成為高效表達異源蛋白常用的原核表達系統(tǒng)。

服務范圍

1. 世聯(lián)博研生命科學服務中心有自己的質(zhì)粒載體庫，以及Clontech、Invitrogen、Stratagen、Novagen、Promega、Amersham等公司的質(zhì)粒載體。均為實驗室常用質(zhì)粒載體。

如有需要，請聯(lián)系我們。

2. 世聯(lián)博研生命科學服務中心為客戶構建或you化改造te定的載體，將目的基因裝載到te定的載體上，同時根據(jù)客戶需要，對載體進行you化（包括啟動子you化、篩選標記you化、其它調(diào)控元件you化、密碼子you化以及表達you化篩選等），使得到的載體更適合蛋白表達與大腸桿菌內(nèi)其他操作。

收費標準

服務周期

1. 30個工作日左右，具體視客戶要求以及載體類型而定。

2. 如客戶需表達重組蛋白，詳情請查看蛋白質(zhì)表達服務，服務周期根據(jù)其蛋白表達純化的具體情況而定，請來電咨詢。

客戶須知（對材料的要求、注意事項）

1. 客戶需提供目的基因的名稱及基因序列，以及包含有目的基因的質(zhì)粒。如有引物也可提供，或者由公司代合成，費用另計�？蛻粢部商峁┹d體，常用載體世聯(lián)博研生命科學服務中心免費提供。

2. 本公司在收到客戶提供的材料信息后的弟二個工作日起開始實驗。

服務程序

1. 可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《原核表達質(zhì)粒載體構建服務訂單》發(fā)至我公司郵箱。

2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3. 可電話聯(lián)系詳談有關具體要求和服務內(nèi)容。

4. 簽訂《原核表達質(zhì)粒載體構建服務合同》，預付實驗總費用的50%作為實驗預付款。

5. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸，以確保實驗物品的安可靠。

6. 實驗結束后，本公司將結果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關材料
A.對于原核表達載體構建服務，我們提供：

原核表達載體；

構建好的重組質(zhì)粒1μg；

含有重組質(zhì)粒的表達保種菌；

電泳圖譜，測序圖譜以及酶切圖以及完整的實驗報告。

B. 對于原核表達載體you化服務，我們提供：

原核表達載體；

載體改造后目的基因的測序結果，質(zhì)粒1ug以及含有重組質(zhì)粒的甘油菌；
提供誘導前后目的蛋白的SDS-PAGE電泳圖（考馬斯亮藍染色）；

完整的實驗報告。

7. 客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔。

服務項目簡介

大腸桿菌(E. coli)作為表達載體，具有兩個顯著特征：操作簡單，可在廉價的培養(yǎng)基中高密度生長。它的這些特征使其在科研應用中成為高效表達異源蛋白常用的原核表達系統(tǒng)。

盡管大腸桿菌有眾多的you點，但并非每一種基因都能在其中高效表達。這歸因于每種基因都有其te的結構、mRNA的穩(wěn)定性和翻譯效率、蛋白質(zhì)折疊的難易程度、宿主細胞蛋白酶對蛋白質(zhì)的降解、外源基因和E. coli在密碼子偏好性上的主要差別以及蛋白質(zhì)對宿主的潛在毒性等等。

服務項目

1. 質(zhì)粒載體庫

原核表達、酵母表達載體、哺乳動物細胞表達載體等；Clontech、Invitrogen、Stratagen、Novagen、Promega、Amersham等公司的質(zhì)粒載體。

2. 載體構建及you化

（1）啟動子you化

（2） 篩選標記you化

對載體上的Amp抗性、Kan抗性、Tet抗性及LacZ等地改造

（3） 其他調(diào)控元件you化

SD序列、起始密碼子、GC含量、RNA的二級結構、目的蛋白的大小等，皆需考慮。

（4） 密碼子you化

E.coli不常用的密碼子

經(jīng)過以上you化，得到的載體更適于蛋白表達與大腸桿菌內(nèi)其他操作。將克隆的目的基因插入原核表達載體后，導入大腸桿菌用于表達目的蛋白。原核蛋白表達系統(tǒng)是迄今為止為成熟可靠的蛋白表達系統(tǒng)，能快速表達各種不同來源蛋白。所制備的重組蛋白可用于藥物篩選、結構生物學研究、細胞生物學研究、蛋白質(zhì)組學研究等的一系列領域。

FAQ（Frequently Asked Questions）

1. 原核表達載體的選擇上有什么要求嗎？

用什么樣的原核表達載體，應注意以下幾點：1.載體的多克隆位點是否有與您目的片斷相同的酶切位點，且您的目的片斷插入后是否會產(chǎn)生移碼突變；2.您是否有相應的載體及其表達宿主菌；3.您準備采用什么方法純化目的蛋白，因不同載體表達蛋白后的純化方法并不一樣。

2. 原核表達載體構建完成后，貴公司提供哪些結果？

實驗結束后，本公司將結果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關材料：原核表達載體；構建好的重組質(zhì)粒1μg；含有重組質(zhì)粒的表達保種菌；電泳圖譜，測序圖譜以及酶切圖以及完整的實驗報告。

3. 原核表達載體構建客戶需要提供目的基因么？

客戶需提供目的基因的名稱及基因序列，以及包含有目的基因的質(zhì)粒。